Патологическая анатомия / Педиатрия / Патологическая физиология / Оториноларингология / Организация системы здравоохранения / Онкология / Неврология и нейрохирургия / Наследственные, генные болезни / Кожные и венерические болезни / История медицины / Инфекционные заболевания / Иммунология и аллергология / Гематология / Валеология / Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация, первая помощь / Гигиена и санэпидконтроль / Кардиология / Ветеринария / Вирусология / Внутренние болезни / Акушерство и гинекология Медицинска паразитология / Патологична анатомия / Педиатрия / Патологична физиология / Оториноларингология / Организация на здравна система / Онкология / Неврология и неврохирургия / Наследствени, генетични заболявания / Кожни и полово предавани болести / Медицинска история / Инфекциозни заболявания / Имунология и алергология / Хематология / Валеология / Интензивно лечение, анестезиология и интензивни грижи, първа помощ / Хигиена и санитарен и епидемиологичен контрол / Кардиология / Ветеринарна медицина / Вирология / Вътрешна медицина / Акушерство и гинекология
основен
За проекта
Медицински новини
За автори
Лицензирани книги по медицина
<< Предишна Следващ >>

Определяне в животински продукти на микроскопични гъбички и техните метаболити - микотоксини

Цел на урока: Да се ​​запознаем с разпределението на микотоксините и ефекта им върху организмите, да изучим методи за изследване на микроскопични гъбички и остатъчни количества микотоксини в животински продукти



цели:

1. Изследване на разпространението и опасността от излагане на микотоксини върху жив организъм

2. Запознайте се с микологичните и микотоксикологичните методи на изследване

3. Посейте тестовите проби от продукти в специализирани среди, за да откриете микроскопични гъбички

4. Определете концентрацията на микотоксини в изследваните продукти.



Обекти на изследване. Проби от месо, мляко, сирене, ядки.

Оборудване и реактиви. Агар Чапек, Сабуро; петри; епруветки; спиртна лампа; ножици; пинсети, Пастерни пипети; дисектиращи игли; стъклени пързалки; Гъбичен щам на Aspergillus flavus; микроскоп; TLC комплект; микотоксинови стандарти; термостат; бели мишки, плъхове, зайци, кокошки, патета; Guppy риба; хлороформ; оцетен анхидрит; сярна, солна киселина.



Кратко описание на микроскопични гъбички

и техните метаболити

От естествените екотоксини - замърсители на селскостопански суровини и храни, микроскопичните гъбички и техните токсини представляват най-голяма опасност за общественото здраве и здравето на животните.

Гъбичките са хеморгаротрофни микроорганизми с еукариотна клетъчна организация, в които липсват фотосинтетични пигменти. Гъбите са класифицирани като гъби (лат.) Или микота (гръцки), които включват около 120 000 вида. Те имат редица свойства, присъщи на животински и растителни организми. Гъбичките принадлежат към еукариотите, лишени са от хлорофил и имат включени хитин в клетъчната мембрана.

Един от най-благоприятните субстрати за развитието на различни видове микроскопични гъбички е растителен фураж. В хода на живота си гъбите отделят различни метаболити - микотоксини, които заедно с храната влизат в тялото на животното, намаляват неговата устойчивост, допринасят за развитието на инфекциозни и незаразни болести, намаляват продуктивните качества на животните и причиняват сериозни щети на организма в големи количества до смъртта. Микотоксините представляват група химически съединения, характеризиращи се с висока токсичност, мутагенни, тератогенни, канцерогенни и имуносупресивни свойства.

Понастоящем са известни повече от 250 вида микроскопични гъби, които произвеждат, според различни източници, около 400 микотоксини и е вероятно да се увеличат поради установяването на етиологията на новите микотоксикози. Токсините от гъбички от рода Aspergillus, Fusarium, Penicillium са най-опасни. Сред най-опасните микотоксини са: афлатоксини, охратоксини, зеараленон, трихотеценови микотоксини, цитринин, патулин, треморени микотоксини, ерготоксини. Всички те са високо стабилни и запазват биологичната си активност в замърсен субстрат за дълго време.

Афлатоксините са един от най-силните канцерогени от биологичен произход с изразена хепатотропия. Поради своята специална биологична активност и широко разпространение, афлатоксин В1 е от особена опасност.

Афлатоксините имат способността силно да флуоресцират, когато са изложени на дълговълнова ултравиолетова радиация, което е в основата на почти всички физикохимични методи за тяхното откриване и количествено определяне. Трябва да се отбележи, че афлатоксините практически не се унищожават по време на обичайната технологична и кулинарна обработка на замърсени хранителни продукти.

Основният следсмъртен диагностичен признак на афлатоксикоза обикновено е увреждане на черния дроб, развиващо се в различна степен и се характеризира с инфилтрация, дегенерация, кариолиза и пролиферация на мезенхима. Пролиферацията често води до образуването на тумор на повърхността на черния дроб. Промените във вида на карцинома и саркома могат по-късно да се превърнат в рак. Аспергилус токсините свързват ДНК и по този начин инхибират образуването на РНК и протеин, така че някои автори започват да изучават ефекта му върху имунитета и резистентността. От това време е установено, че токсините, дори в най-ниска концентрация, добавени към храната за домашни птици, намаляват устойчивостта на последните към инфекции.

Канцерогенната активност на афлатоксините се различава от действието на други хепатокарциногенни вещества по някои характеристики: възможността за развитие на туморен процес не само при продължително излагане на малки дози токсин, но и с еднократна доза голяма доза; развитието на чернодробен тумор често без предварителна цироза; развитие на фона на дълготрайна жлъчна пролиферация на хепатоцелуларен рак, а не аденокарцином.

Мутагенният ефект на афлатоксините е проучен върху различни организми и видове растителни и животински клетки. Както афлатоксин В1, така и смес от афлатоксини индуцират хромозомни аберации (главно хроматидни разкъсвания и транслокации) в растителни клетки, човешка левкоцитна клетъчна култура, кенгуру на плъхове и бъбреци от китайски хамстер и клетки от костен мозък на мишки, хамстери и маймуни.

Данните за тератогенните свойства на афлатоксините са оскъдни. В експериментите тератогенният ефект на афлатоксин В1 е демонстриран върху хамстери, плъхове, мишки и пилета.

Резултатите от изследването на ефекта на афлатоксините върху имунния отговор при различни животни и птици показаха, че те са силни имуносупресори и потискат както клетъчния, така и хуморалния имунитет, както и фактори за неспецифична защита на организма. Резултатът от намаляване на функционалната активност на имунната система на животното под влияние на афлатоксини е намаляване на тяхната устойчивост към инфекциозни заболявания. Максимално допустимата концентрация на афлатоксини в хранителните продукти е 0,005 mg / kg (Е. М. Кожевников, Б. С. Майканов).



Методи за изолиране на гъби

Най-широко използваните твърди хранителни среди са пивна агар, аппепек агар, картофен агар с добавяне на различни антибиотици за инхибиране на растежа на бактериите.

Отглеждането се извършва в термостат при температура 24-26 и 37 ° С в продължение на 3-12 дни, в зависимост от вида на развиващите се гъби.

При изолиране на гъбички от засегнатия материал се използват различни методи, в зависимост от това каква е целта: изолиране на повърхностна микофлора или дълбока. За да се определи общата микобиота, обикновено се използва следната техника: отделни зърна или ситно нарязани парчета от изследваните проби се поставят върху повърхността на хранителната среда без предварителна обработка и се наблюдава растеж на гъбични колонии.

Когато се открие повърхностна микрофлора, промивката се прави със стерилна вода и се нанася върху хранителни среди. За да се промият повече спори, се препоръчва пробата да се разклати добре.

По-сложна е техниката за изолиране на дълбоката микофлора, при която предварителната дезинфекция на пробата е задължителна, за да се потиснат гъбичките, които се намират на повърхността на изследвания материал.



Определяне на концентрацията на афлатоксин в животински продукти чрез тънкослойна хроматография

Определянето на концентрацията на афлатоксини в храната, млякото, вътрешните органи и мускулната тъкан се извършва по метода на двумерна тънкослойна хроматография с помощта на плочи Silufol, съгласно „Методическите препоръки за откриване, идентифициране и определяне на афлатоксини в храните“.

Методът се основава на извличане на токсини от фуражи с воден ацетон (GOST 2603-71 ацетон) при шега, пречистване на първоначалния екстракт от свързаните примеси с хексан (TU 6-09-3375-73) с по-нататъшно повторно извличане на токсини в хлороформ (GOST 3160-51 Medical chloroform) или бензен (GOST 5955-75 Бензен) и пречистване върху хроматографска колона със силикагел и алуминиев оксид. Идентифицирането и количественото определяне се основава на тънкослойна хроматография на екстракта с помощта на плочи Silufol, последвано от гледане в ултравиолетова светлина с дължина на вълната 365 n.
и сравнение със стандартите за афлатоксин.



Контрол на токсичността на изпитвания материал

Пробите за наличие на микотоксини се изследват с помощта на различни методи, които могат да бъдат разделени на три основни групи: биологични, химични и физикохимични.

Биологични методи. С помощта на този метод се извършва био-тест върху животни, при които е регистрирана токсикоза. При извършването на тази работа са важни пробите от диетата и фуражите, взети за експеримента.

Определяне на хранителната токсичност при лабораторни животни. За тези цели се използват бели мишки, плъхове, морски свинчета, зайци, пилета, патета, гълъби, кученца, котенца и др. Дневната норма на конвенционалните фуражи се заменя с тестовата храна. За най-добрата му годни за консумация е препоръчително животните да се поддържат предварително на диета за гладуване. По време на експеримента поливането не е ограничено. Количеството изяден фураж и състоянието на експерименталните животни се записват ежедневно. В зависимост от степента на хранителна токсичност проявата на клинични признаци на микотоксикоза се проявява в различно време. Типични клинични признаци: инхибиране на треперене, пареза, парализа, загуба на блясък. Храни, засегнати от токсигенни гъби, причиняват смъртта на животните в периода от 1 до 30 дни с признаци на увреждане на централната нервна система. При птиците се отбелязват цианоза на гребена и обеци, диария и сънливост.

В допълнение към храненето на тестовите проби на животни, можете да ги въведете директно в стомаха.

Въведение в стомаха. Водната каша се приготвя от тестовата проба и се прилага на мишки на празен стомах в продължение на 3 дни в количество 0,5 ml. Тъпа, леко огъната игла може да се използва като сонда върху спринцовка. Токсичността на фуража се определя от времето на смъртта на мишките и броя на въведените екстракти или екстракти. За изследване на храната, засегната от A. flavus, екстрактът от пробата се въвежда в жлезистия стомах на еднодневни патенца: на 1-ви ден - 0,5 мл, на 2-ра - 0,75, на 3-ти - 1,25, в 4-ти ден - 1,5 мл. Пателата се наблюдават 7 дни, след това се убиват и черният дроб се изследва. Наличието на мастна дегенерация, развитието на пролиферативни процеси в жлъчните пътища, множество кръвоизливи показват наличието на афлатоксини в изследваните фуражи.

Поставяне на кожен тест на заек. Тази техника е най-разпространената поради сравнителната й простота. Кожен тест дава възможност не само да се отговори на въпроса за токсичността на храната, но и да се направи представа за степента на токсичност на гъбичките по естеството на кожните лезии.

Като експериментални животни се използват зайци с непигментирана кожа, живо тегло 2-3 кг и добра дебелина. При животните внимателно, избягвайки скарификацията и травматизацията, нарязвайте вълна от страните си. Полученият екстракт се нанася върху откритата зона на кожата с диаметър 3 см два пъти с интервал от 24 часа, като я втривате със стъклена пръчка в цялата изрязана повърхност на кожата. За да се предотврати облизването на екстракта, което причинява дразнене на кожата, върху шията на зайчето се поставя дървена яка. Отчитането на реакцията се провежда ежедневно в продължение на 3-7 дни. Степента на токсичност се диференцира от дълбочината и естеството на възпалителната реакция:

I степен - зачервяване, повишена чувствителност на кожата, десквамация;

II степен - зачервяване, болезненост, леко сгъстяване на кожата, дребен самотен с просо зърно или по-малко жълтеникави везикули, пилинг;

III степен - зачервяване, силно удебеляване, болезненост, сгъване на кожата, жълти огнища по цялата повърхност, повърхностна некроза, понякога язви, непрекъснато краста;

IV степен - зачервяване, силно подуване, изпъкнало под формата на масивен вал на долната граница; некроза, улавяне на подкожната тъкан, често образуването на дълги лечебни язви. Крастата е гъста и твърда.

Очен тест. Счуканият фураж се залива с вода в съотношение 1:10. След 24 часа екстракция се филтрира през марля и след това през хартиен филтър. Контролът е воден екстракт. На експерименталния заек 5 капки от изследвания екстракт се инжектират в конюнктивалната торбичка на едното око на интервали от 5 минути за 1 час. Контролен екстракт се инжектира във второто око. Един час след прилагането на токсичния екстракт се забелязва разширение на зеницата от 3-4 мм, което продължава 5 часа. Контролната качулка причинява краткосрочно разширяване на зеницата от 1-2 мм. Техниката се използва за определяне на токсичността на гъбички от рода Fusarium и микромицет Ph. chartarum. Прилагането на sporidesmin причинява увреждане на роговицата и страбизъм.

Проба върху бради от пилета. Смляната храна се излива с етер или алкохол-етер и се екстрахира в продължение на 24 часа, след това се филтрира и разредителят се изпарява.

Етеричните екстракти се въвеждат в една от пилешките барбуси в доза 0,1-0,2 мл, втората брада служи като контрола. Степента на токсичност се определя от наличието на възпалителен процес - подуване на брадата. Дебелината на брадата може да достигне 5-8 мм. При птицата за контрол дебелината на брадата не надвишава 4 мм. Реакцията е най-изразена 20-24 часа след прилагане на екстрактите.

Токсико-биологичната оценка на изследваните проби се извършва върху аквариумни риби с гупи съгласно методологията „Биологична оценка на токсичността на продуктите“. Принципът на методологията се основава на извличането на фракции на афлатоксин от ацетон от анализирани проби от мляко с пречистване от мастни вещества с хексан и реекстракция в хлороформ. Изсушените екстракти от проби от мляко се разтварят отделно в 5 ml ацетон и се прехвърлят в чаши от 1000 ml с 500 ml аквариумна вода при стайна температура (20 ° C). По пет възрастни гупи се поставят във всяка чаша, които се наблюдават, отбелязвайки смърт след 24 часа. Оценката на токсичността на пробите от мляко е установена по схемата, показана в таблица 2.



Таблица 2 - Оценка на степента на токсичност



В допълнение към горните биологични методи се прави тест върху еритроцитите на плъхове, върху сърцето на жабата, на най-простите и яйца на молюски.

Микробиологични методи. Микробиологичните методи за откриване на микотоксини се основават на принципа на инхибиране на растежа на бактериални и дрождови тестови култури под действието на тестовите екстракти. Чувствителни микроорганизми бяха избрани за всеки микотоксин. За фузариотоксини, Т-2-токсин и зеараленон се използва култура на дрождите Saccharomyces fragilis, за фумигатоксини - Staphylococcus aureus, за дендродохиотоксини - ежедневната култура на Saccharomyces vini, за патулин - Bacillus subtilis. За провеждане на изследвания се използват следните методи: Метод на дискотека на хартия, метод на цилиндър и метод на дупки.

Химически методи. Методите се основават на свойството на гъбични токсини, съдържащи се в етерни екстракти, когато се комбинират с химикали, променят цвета си.

Реакция на Либерман-Бъркърд. Екстракт от фураж или гъбички от стахиботриотоксикоза и фузариотоксикоза в количество 2-3 мл се изпарява до утайка и се разтваря отново в хлороформ. Няколко капки оцетен анхидрид се добавят към разтвора. Полученият разтвор внимателно слоена концентрирана сярна киселина върху стената. В присъствието на токсични вещества на интерфейса на течността се появява зелен пръстен, който след това става лилав и по-късно кафяв.

Реакцията с концентрирана солна киселина. 0,5 ml концентрирана солна киселина се добавя към 1 ml екстракт. В присъствието на токсични вещества от гъбички от рода Fusarium, разтворът става червен или вишнев.

Реакцията с концентриран разтвор на амоняк. 5-7 ml 96% етанол се добавят към 1 ml от екстракта от токсини в серен етер, затопля се внимателно и се добавят 5-7 ml 25% воден разтвор на амоняк. При кипене в продължение на 5-10 минути в присъствието на микотоксини се появява интензивен черно-виолетов цвят, след което се образува черна утайка.
<< Предишна Следващ >>
= Преминете към съдържанието на учебника =

Определяне в животински продукти на микроскопични гъбички и техните метаболити - микотоксини

  1. Определяне на хормони в животински продукти
    Цел на урока: Да се ​​проучи и овладее серийният анализ на месните продукти за съдържанието на хормонални препарати от ELISA, като се използват стандартни комплекти за анализ на имуносорбент, свързан с ензимите. Задачи: 1. Подгответе проби. 2. Определете остатъчното съдържание на хормонални препарати в месото и месните продукти. Обекти на изследване. Месо и месни продукти от говеждо, свинско и домашни птици.
  2. ОБЩА ХАРАКТЕРИСТИКА НА МИКРОСКОПИЧНИТЕ ГЪБИ - МОЛД
    Микроскопските гъби (плесени) принадлежат към групата на микроорганизмите, които засягат главно растителни обекти по време на вегетацията или съхранението им. Гъбичният паразитизъм възниква поради растителните хранителни вещества, в резултат на което добивите на културите и хранителната стойност на приготвените фуражи рязко намаляват. В допълнение, някои видове микроскопични гъбички
  3. МЕТОДИ ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ТОКСИЧНИ ВЕЩЕСТВА В ЕКОЛОГИЧНИ ОБЕКТИ, ЖИВОТНИ ЦВЕТНИ И ЖИВОТНИ
    Химически токсикологичен анализ във ветеринарната токсикология е от решаващо значение. При установяване на диагноза на отравяне, изучаване на миграцията на токсични вещества в обекти на околната среда и тялото на животните, провеждане на ветеринарно-санитарни оценки на фуражи и хранителни продукти, като правило се използват само химико-аналитични изследвания. Особено тяхното значение се е увеличило през миналото
  4. Гъби продукти
    Переработка грибов производится на грибоварных пунктах, построенных и оборудованных в соответствии с действующими санитарными правилами. Пункты должны иметь источник питьевой воды. Грибы перед переработкой тщательно сортируют по видам. Запрещается прием перезрелых, ослизлых, червивых, поломанных грибов, а также съедобных, но не значащихся в стандартах по переработке и заготовке грибов (дубовик
  5. Ветсанэкспертиза растительных продуктов и грибов
    По ветеринарно-санитарным правилам на рынках разрешается продавать следующее: растительные пищевые продукты полеводства, садов и огородов; корнеклубнеплоды (картофель, морковь, свекла, петрушка, редис, пастернак, редька, хрен, цикорий, лук репчатый, чеснок в головках и др.); овощи (капуста белокочанная и красная, капуста цветная, томаты, огурцы, кабачки, баклажаны и др.); зелень (лук и чеснок
  6. ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНЫЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА НА РЫНКАХ
    Качество пищевых продуктов животного происхождения при их реализации на колхозных рывках контролируют ветеринарные специалисты лабораторий ветеринарно-санитарной экспертизы. Лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы организуют на рынке в установленном порядке. Они входят в состав городской или районной станции по борьбе с болезнями животных, районной (межрайонной) ветеринарной лаборатории.
  7. РЕГЛАМЕНТЫ ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ПРИНЦИПЫ ИХ НОРМИРОВАНИЯ В КОРМАХ И ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОВОДСТВА
    Для предотвращения отравления сельскохозяйственных и диких животных, в том числе рыб, птиц, пчел, токсическими веществами, применяемыми для обработки растений, почвы, водоемов и животных, а также с целью профилактики загрязнения продуктов питания животного происхождения их остатками устанавливани pel плмопты их безопасного использования и максимально до-iivi'iiiMi.if у|ювни (МДУ) содержания в
  8. Проверка работи. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животноводства и гигиены сельскохозяйственных животных, 2009
    1. Кратко опишите (форма, размер, цвет) и сделайте схему – зарисовку топографии лимфатических узлов головы, внутренних органов и туши крупного рогатого скота. 2. Вынужденный убой животных в вашем хозяйстве(место и способ убоя, причины и пути реализации мяса, сравните с действующими правилами и сделайте соответствующие выводы). 3. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя животных при
  9. Балджи Ю.А., Майканов Б.С., Жанабаева Д.К.. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животноводства при контаминации посторонними веществами., 2009
    Дана краткая характеристика основным биогенным, техногенным и радиоактивным посторонним веществам в продуктах животного происхождения и методам идентификации и определения остаточных их количеств. Изложен порядок проведения лабораторно-практических занятий. Методическое указание предназначено для студентов сельскохозяйственных вузов, обучающихся по биологическим
  10. ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА И СЫРЬЯ ПРИ НЕЗАРАЗНЫХ БОЛЕЗНЯХ И НЕКОТОРЫХ СИНДРОМАХ
    ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА И СЫРЬЯ ПРИ НЕЗАРАЗНЫХ БОЛЕЗНЯХ И НЕКОТОРЫХ
  11. Определение радиоактивности объектов внешней среды и животных продуктов
    Цель занятия: Приобрести практический навык радиационного контроля объектов внешней среды, мяса, вторичных продуктов убоя скота, мясных продуктов экспресс-методами радиометрии. Задачи: 1. Научиться отбирать пробы объектов внешней среды 2. Изучить правила отбора проб животных и растительных продуктов Объекты исследования. Мясо и кость различных видов убойных животных и птицы;
  12. Пищевые отравления продуктами, ядовитыми при определенных условиях
    Пищевые отравления продуктами, ядовитыми при определенных условиях, встречаются очень редко. В эту группу входят отравления продуктами растительного (фазин сырой фасоли, амигдалин ядер косточковых плодов, фагин буковых орехов, соланин картофеля) и животного (ткани рыб, мидии, пчелиный мед) происхождения. Амигдалин. Высоким содержанием амигдалина характеризуются ядра косточек абрикосов и
  13. Определение фенолов, бенз(а)пирена, нитратов и нитритов в мясных продуктах
    Цель занятия: Изучить методы определения фенолов и бенз(а)пирена в копченных мясных продуктах Задачи: 1. Подготовить исследуемые пробы 2. Определить границы проникновения фенолов в колбасных изделиях 3. Изучить качественные и количественные методы определения бенз(а)пирена 4. Изучить методы определения нитратов и нитритов Определение фенолов в копченных мясных продук-тах
  14. МЕТАБОЛИТЫ АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ РОЛЬ В МЕДИЦИНЕ
    Р. Поль Роберт сон (R. Paul Robertson) Содержание этой главы сконцентрировано на образовании и механизме действия физиологически активных метаболитов арахидоновой кислоты и на биологическом феномене, в котором могут участвовать эти вещества. Образование эйкосаноидов. Простагландины — первые из выделенных метаболитов арахидоновой кислоты — названы так потому, что впервые они были
Медицински портал "MedguideBook" © 2014-2019
info@medicine-guidebook.com