Патологическая анатомия / Педиатрия / Патологическая физиология / Оториноларингология / Организация системы здравоохранения / Онкология / Неврология и нейрохирургия / Наследственные, генные болезни / Кожные и венерические болезни / История медицины / Инфекционные заболевания / Иммунология и аллергология / Гематология / Валеология / Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация, первая помощь / Гигиена и санэпидконтроль / Кардиология / Ветеринария / Вирусология / Внутренние болезни / Акушерство и гинекология Медицинска паразитология / Патологична анатомия / Педиатрия / Патологична физиология / Оториноларингология / Организация на здравна система / Онкология / Неврология и неврохирургия / Наследствени, генетични заболявания / Кожни и полово предавани болести / Медицинска история / Инфекциозни заболявания / Имунология и алергология / Хематология / Валеология / Интензивно лечение, анестезиология и интензивни грижи, първа помощ / Хигиена и санитарен и епидемиологичен контрол / Кардиология / Ветеринарна медицина / Вирология / Вътрешна медицина / Акушерство и гинекология
основен
За проекта
Медицински новини
За автори
Лицензирани книги по медицина
<< Предишна Следващ >>

Лабораторна диагностика на сифилис

Откриване на бледи трепонеми в биологичен материал.

А) Микроскопия с тъмно поле.

Най-убедителното доказателство за трепонемалния характер на заболяването е пряката визуализация на трепонемите. С първичен сифилис върху бледа трепонема се изследват отделите на ерозивно-язвени папулозни елементи в областта на гениталиите, устната кухина и пунктата от регионалните лимфни възли. При вторичен сифилис се използва материал от различни лезии на кожата и лигавиците. Амниотична течност може да се използва за диагностициране на вроден сифилис. Микроскопското изследване на бледия трепонема има вид на тънка спирала с 8-12 еднакви къдрици. В тъмното зрително поле човек може да наблюдава транлационното въртене на трепонемата около оста, въртене и флексия. Важен признак е изкълчване в средната част ("изгладено от желязо"), което отличава причинителя на сифилиса от другите трепонеми. Ако резултатите са отрицателни, микроскопското изследване се повтаря или докато се установи бледа трепонема, или докато диагнозата не бъде потвърдена от резултатите от серологично изследване. Откриването на специфични микроорганизми с характерна морфология, подвижност и антигенна специфичност позволява диагностицирането на сифилис при първичен, вторичен, ранен вроден, рецидивиращ сифилис, дори без да се вземат предвид резултатите от серологичните изследвания. Трябва да се има предвид, че отсъствието на микроорганизми не изключва диагнозата сифилис. Липсата на трепонеми при типични лезии може да се дължи на продължителността на лезията, предварително лечение на пациента или лоша техника за вземане на проба или преглед на материал. При липса на патогени в лезията трябва да се изключи възможността за други заболявания (херпес, мек шанкър).

Б) Полимеразна верижна реакция.

Използва се за определяне на специфични последователности на ДНК. Методът се състои в многократно увеличаване (амплификация) на количеството ДНК на диагностицирания микроорганизъм. Разработката на варианти на PCR за диагностициране на сифилис се дължи на липсата на стандартни тестове за ранен серонегативен, вроден сифилис и невросифилис. Откриването на T. pallidum чрез PCR значително се улеснява от изразения генетичен консерватизъм и практическото отсъствие на рекомбинация дори между подвидовете. Голямо предимство на PCR е способността да се автоматизира реакцията чрез даден цикличен температурен режим. Използването на PCR може да има голямо значение при диагностицирането на вродения сифилис (пасивният трансплацентарен трансфер на антитела не влияе върху резултатите от теста), невросифилис (чувствителността на съществуващите тестове е около 50%), първичен серонегативен (понастоящем един от критериите е директното микроскопично откриване на трепонем) и при диагностицирането на сифилис при заразени с ХИВ хора.

2. Нетрепонемни тестове.

Нетрепонемните тестове определят антитела от клас IgG и IgM срещу липиди (фосфолипиди), липопротеини, освободени от увредени клетки-гостоприемници поради сифилитична инфекция, и липиди, които съставляват мембраната на бледата трепонема. Антилипидните антитела могат да се появят не само поради сифилис или други трепанематози, но и в отговор на някои остри и хронични заболявания, при които се наблюдава разрушаване на тъканите. Антилипидните антитела (реагини) се образуват 7-14 дни след образуването на шанкър или 4-5 седмици след заразяването. По принцип нетрепонемните тестове се използват в два случая:

• Нетрепонемните тестове, поради тяхната евтиност, достъпна цена, простота и бързо време на провеждане, се използват за скрининг на сифилис като скринингова реакция.

• Променяйки количествените нетрепонемни тестове, те преценяват степента на ефективност на лечението на сифилис и установяват неговото излекуване. Следователно, нетрепонемните тестове се използват в комбинация с трепонемални тестове за установяване на диагноза на сифилис и се провеждат преди лечението, по време на лечението и след лечението през определени интервали от време.

Недостатъци на нетрепонемните тестове:

1) Фалшиво отрицателни резултати - при изследване на неразредни серумни проби, съдържащи голям брой антитела, поради така наречения прозонов феномен. Това явление може да се наблюдава в ранните стадии на сифилиса и при пациенти със съпътстваща HIV инфекция.

2) Недостатъчна чувствителност за диагностициране на сифилис в късен стадий

3) Фалшиви положителни резултати (биологично фалшиви положителни реакции) при наличие на други остри или хронични заболявания.

A) Тест за бързо реагиране на плазма (RPR).

RPR (Rapid Plasma Reagins) - тест за бързи плазмени реактиви и неговата автоматизирана модификация - автоматизиран тест за реагиране (ART, Automated Reagin Test). Тези тестове могат да бъдат прочетени визуално поради наличието на оцветени вещества в подготвения антиген. RPR тестът е разработен за полето и понастоящем е най-често срещаният нетрепонемен тест. Той се държи на пластмасови таблетки с отпечатани кръгове. Когато се посочват количествени или качествени модификации на реакцията, стандартните количества неразреден серум или неговите серийни разреждания се смесват с антиген, съдържанието на въглищни частици. Плаката с антиген и серум се завърта при 1000 об / мин за 8 минути. Антигенът не се привързва към тези частици, но при наличието на антикардиолипинови антитела в серума, комплексите антиген-антитяло флокулират, частиците на въглищата сякаш се улавят в образуваната мрежа и коагулират. Резултатите от теста се четат на влажно място с ярък тест веднага след реакцията. Тестът използва неотоплена суроватка.

Б) VDRL тест.

VDRL (под името лаборатория за развитие - Лаборатория за изследване на венерически болести). В този тест прясно приготвен антиген и инактивиран серум се смесват в стъклена ямка чрез механично въртене. Ако антитела към кардиолипиновия антиген присъстват в серума, агрегатите се образуват под формата на къси пръчковидни структури, които се откриват микроскопично. Използва се количествена модификация на VDRL към разреждане на серум от 1:64. VDRL е единственият тест, препоръчан за изследване на цереброспиналната течност.

В) Реакцията на свързване на комплемента (CSC, реакция на Wasserman).

Реакцията на Васерман се основава на феномена на свързването на комплемента. При формулирането на реакцията се използват както специфични антигени от бледи трепонеми, така и неспецифични антигени (кардиолипин - екстракт от говежди сърдечен мускул). Степента на положителност на реакцията на Васерман се оценява от броя на плюсовете: ++++ (рязко положителен) +++ (положителен) ++ (слабо положителен) + (съмнително) - (отрицателно) Реакцията на Васерман задължително се използва в комбинация с две утаечни реакции (Kana и Sachs- Витебск). Имунологичната същност на тези реакции не се различава от PB, но за тях се приготвят по-концентрирани антигени, които при взаимодействие със серумни реагенти дават видима утайка, която се оценява качествено (++++, +++, ++, +, -). Диагнозата на първичен серонегативен сифилис се поставя само с отрицателни стандартни серологични реакции. Реакцията на Васерман (RV) става положителна при 100% от пациентите във вторичния серопозитивен период на сифилис. С третичен активен сифилис - при 65-70% от пациентите. При късни форми на сифилис на вътрешните органи и нервната система, при 50-80% от пациентите. При пациенти с ранен вроден сифилис серологичните реакции са положителни в почти 100% от случаите. С късен вроден сифилис - в 75-80% от случаите.

3. Трепонемални тестове.

Както при нетрепонемните тестове, и при трепонемалните тестове се използва имунологичната реакция на антиген-антитяло. Но трепонемните антигени се използват като антигени - или непокътнати трепонеми, или пречистени и ултразвукови трепонеми, или рекомбинантни антигени. За провеждане и откриване на резултатите от реакцията антиген-антитела се използват по-сложни и скъпи методи.

Трепонемалните тестове са потвърждаващи сифилис тестове, но в малък процент от фалшивите положителни резултати могат да се появят. Трепонемните тестове се използват само за диагностициране на сифилис и не се използват за наблюдение на излекуването.

А) Имунофлуоресцентна реакция (RIF).

Принципът RIF се основава на откриването на флуоресцентни антитела, тъй като белязаните с флуорохром антитела не губят способността си да се свързват със съответния антиген и по този начин причиняват лекарствата да светят в синьо-виолетовите лъчи на живачно-кварцова лампа. Отличителна черта на RIF, в сравнение със стандартните серологични реакции, е по-висока чувствителност (RIF вече е положителен в началния серонегативен период на сифилис) с висока специфичност.
Стойността на RIF беше отбелязана при идентифициране на пациенти с латентна и късна форма на сифилис с отрицателни резултати на RIBT. Реакцията е поставена в няколко модификации и най-ценното е RIF-200, чиято основна цел не е ранната серодиагностика на сифилиса, а разпознаване на неспецифични резултати от комплекс от серологични реакции и серодиагностика на латентен сифилис. RIF-200 обаче няма абсолютна специфичност, следователно въпросът за наличието или отсъствието на заболяването трябва да бъде решен върху комбинация от клинични и други серологични данни.

RIF при вторичен сифилис е положителен в 100% от случаите. При третично активен сифилис RIF е положителен при 92-100% от пациентите. При късни форми на сифилис на вътрешните органи и невросифилис, RIF е положителен при 94-100% от пациентите. При пациенти с ранен и късен вроден сифилис RIF е положителен в 100% от случаите.

RIF много бавно се отрича по време на антисифилитична терапия. В резултат на това е неподходящ за наблюдение на напредъка на лечението.

Б) Пасивна реакция на хемаглутинация (RPHA).

Тест за хемаглутинация за определяне на специфични антитела срещу Treponema pallidum. В RPGA се използват антигени от трепонеми, поради което той е най-специфичният. Чувствителността и специфичността е еквивалентна на RIF-abs. RPGA ви позволява да определите наличието на антитела в проби, които не реагират при тестове за реагин. Положителната проба, открита чрез скрининг, може да се определи количествено с помощта на TPHA-ностиконови реагенти.

В) Ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA).

Методът ELISA се основава на следния принцип: върху твърдофазен носител (в домашни тестови системи и в повечето тестови системи с чуждестранно производство повърхността на ямките от полистиролова плоча се използва като носител), антигенът на патогена се фиксира, антителата към които трябва да бъдат открити. Антиген, имобилизиран на повърхността на твърд носител, обикновено се нарича имуносорбент. Като правило в комплекта на тестовата система е включен готов имуносорбент.

По време на инкубирането на имуносорбента с тест серума в присъствието на антитела към този антиген, те се свързват с комплекса антиген - антитяло. След отстраняване на несвързани имуноглобулини следва инкубация с белязани с ензими антитела към човешки имуноглобулини (конюгат), по време на които антителата, белязани с ензима, се прикрепят към съществуващите комплекси антиген-антитяло (най-често се използва пероксидаза от хрян). След отстраняване на несвързания конюгат по време на инкубацията с субстратния разтвор, ензимът взаимодейства със субстрата, което води до цветна реакция, интензитетът на която зависи от количеството на свързаните серумни антитела (в случай на използване на конюгат пероксидаза, водороден пероксид в комбинация с ортофенилендиамин (CRF) се използва като субстрат , 5-аминосалицилова киселина (5-ASA) или тетраметилбензидин (TMB)). Резултатът от реакцията се оценява спектрофотометрично с изхода на цифрови данни, което елиминира субективността на оценката. Някои ензимни имуноаналитични системи позволяват визуална оценка на резултатите, което може да бъде полезно при липса на подходящо оборудване.

Понастоящем руското министерство на здравеопазването препоръча 10 медицински тестови системи за имуноанализ за диагностициране на домашното производство на сифилис в медицинската практика:

1. “Рекомбибест анти-палидум”, ЗАО Vector-Best, Колцово, област Новосибирск .;

2. "Рекомбибест анти-палидум - общо антитела", ЗАО Vector-Best, Колцово, област Новосибирск .;

3. “IFA - ANTI-LUIS”, NPO “Диагностични системи”, Нижни Новгород;

4. Ензимна имуноаналитична система за откриване на антитела към причинителя на сифилис (Treponema pallidum) на базата на рекомбинантни протеини, BTK „Bioservice”, Москва;

5. „Люскрин”, АД „Ниармедик” и АЗОТ „Диаклон”, Москва;

6. „EKOlab - antipallidum - екран“, LLP EKOlab, Elektrogorsk, Московска област;

7. “IFA - антитрепонема”, ЗАО “Vector-Meistar”, гр. Колцово, област Новосибирск .;

8. "AT - Треп. - IFTS", SE "Алерген", Ставропол;

9. “Сиф - Ат - №№1,2”, Учебно-изследователски институт “Аквапаст”, Санкт Петербург;

10. “IFAanti-CIF”, NPK “Лекарство”, Нижни Новгород.

Г) Имуноблотинг.

Един от съвременните методи за диагностициране на сифилис е Western blot за определяне на IgG или IgM. По време на имуноблотирането Т. pallidum се подлага на електрофореза в градиент на концентрация на натриев додецил сулфат, в резултат на което протеиновите имунодетерминанти се разделят на нитроцелулоза. Тогава отделените „точки“ (петна) се обработват с тествания серум и антитела срещу IgG или IgM, белязани с ензими или радиоактивни вещества. IgG - имуноблотингът по чувствителност и специфичност е подобен на абсорбционния риф. Използването на анти-IgM специфичен конюгат по време на имуноблотинг може да послужи като диагностичен тест за вроден сифилис, по-чувствителен в сравнение с абсорбционния риф.

Г) Реакцията на обездвижване на бледа трепонема (RIBT).

RIBT е диагностично ценен и признат за най-специфичния тест за сифилис. Използването му обаче е ограничено поради високата цена на изследванията и сложността на реакцията. Настройката на RIT е от особено значение при диагностицирането на латентен сифилис, разпознаване на лезии на вътрешните органи и нервната система, по време на прегледи на бременни жени със съмнение за сифилис. Същността на реакцията е загубата на подвижност от бледи трепонеми в присъствието на тестовите серумни имобилизини и активен комплемент. Имобилизините се появяват в кръвния серум на пациенти по-късно от други антитела, а RIBT става положителен по-късно от стандартните серореакции и RIF. Оценката на резултатите от реакцията се извършва чрез процента на обездвижване на бледите трепонеми:

? до 20% - отрицателен;

? 21 - 30% - съмнително;

? 31 - 50% - леко положителен;

? 51 -100% - положителни.

В първичния период на сифилис RIBT при повечето пациенти е отрицателен или слабо положителен. При вторичен пресен сифилис RIT дава положителен резултат при повече от половината от пациентите, но процентът на трепонемална имобилизация е нисък (40-60%). Във вторичния рецидивиращ период на сифилис RIT е положителен при 85-90% от пациентите с изразена степен на обездвижване (80-100%). При третичен сифилис, със специфични лезии на вътрешните органи, нервната система, когато RV често е отрицателен, RIBT дава положителни резултати в 98-100% от случаите (с висок процент на обездвижване). Поради бавния негатив в процеса на антисифилитична терапия, RIBT не е подходящ за наблюдение на курса на лечение. При ранен вроден сифилис RIBT е положителен при 90-98% от децата, с късен вроден сифилис - при почти 100% от пациентите. Диагнозата на латентния сиво-положителен сифилис се поставя само чрез положителни кръвни серореакции с задължително потвърждение на RIBT.
<< Предишна Следващ >>
= Преминете към съдържанието на учебника =

Лабораторна диагностика на сифилис

  1. Лабораторна диагностика на сифилис
    За да се установи диагнозата сифилис, необходимо условие е лабораторно потвърждение, включително откриване на патогена и серологични реакции. За бактериологично изследване се взема тъканна течност (серум) върху бледа трепонема, която се получава по метода на дразнене на ерозия или язви в първичния период, плач и ерозивни папули, ерозия на лигавиците във вторичната
  2. ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА СИФИЛИЗА
    ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА
  3. Общи принципи за диагностика на сифилис
    Диагностични методи, потвърждаващи наличието на сифилис: Диагностични методи, потвърждаващи наличието на различни форми и усложнения
  4. ОБЩИ ПРИНЦИПИ НА КЛИНИЧЕСКА ДИАГНОСТИКА НА СИФИЛИЗА
    За успешна диагноза на сифилис лекар в своята клинична практика трябва да се ръководи от две основни правила. Първият е въпрос, за който един изключителен познавач на сифилиса А. Фурние пише през 1897 г.: „Въпреки че не е трудно да се разпознае твърдият шанкър, е трудно да го запомните по онова време“. Тази разпоредба важи еднакво не само за първичния сифилис, но и за всички други негови клинични
  5. Диагностика и профилактика на вродения сифилис
    Диагноз врожденного сифилиса устанавливается на основании: 1) обнаружения у ребенка активных проявлений сифилиса и положительных серологических реакций; 2) наличия у матери выраженных проявлений сифи лиса, или скрытого, бессимптомного сифилиса, вы являемого на основании положительных результа тов повторного серологического исследования; 3) анамнестических данных, свидетельствующих
  6. Серологическая диагностика сифилиса. Лечение.
    Диагностика: 1. Под микроскопом( в темном поле) 2. Серологическая Приказ 11.61 от 2 сентября 1985 года Чуствительность теста = количество лиц с данным заболеванием / с положительными результатами, Специфичность теста = без данного заболевания / с отрицательными реакциями группа . Отборочные реакции не дают право поставить диагноз. Реакции микропреципитации передложил Овчиников
  7. Серологическая диагностика сифилиса
    Серодиагностика применяется для подтверждения клинического диагноза сифилиса, постановки диагноза скрытого сифилиса, контроля за эффективностью лече ния, как один из критериев излеченности больных сифи лисом, для профилактики сифилиса (обследование опре деленных групп населения). Серологические реакции позволяют выявлять иммунные сдвиги в организме боль ного в ответ на размножение в нем
  8. ЛАБОРАТОРНИ ДИАГНОСТИЧНИ МЕТОДИ
    Клиничната картина на гъбичните кожни заболявания е много полиморфна, поради което във всички случаи диагнозата трябва да бъде потвърдена чрез лабораторни методи за изследване. За лабораторна диагностика на микози се използват микроскопични, луминисцентни, културни, имунологични (алергологични и серологични) методи за изследване, както и експерименти с животни. Лабораторная диагностика
  9. Лабораторно-инструментальная диагностика
    Диагностика выраженной хронической СН с четко очерченными клиническими проявлениями обычно не представляет больших трудностей. Она основана преимущественно на следующих клинических критериях сердечной декомпенсации, приведенных в таблице 50. Для постановки диагноза хронической СН в большинстве случаев необходимо наличие двух "больших" критериев или одного "большого" и двух "малых" критериев. Най-
  10. Лабораторная диагностика
    Среди лабораторных методов диагностики ИЭ ведущее значение имеет бактериологическое исследование венозной и артериальной крови, проводимое не менее 3-х раз. Определение микробиологической природы ИЭ в каждом конкретном случае необходимо для выбора АБТ. Особенно это важно при развитии грибковой и микстинфекции. В зависимости от используемой методики частота высеваемости возбудителя ИЭ
Медицински портал "MedguideBook" © 2014-2019
info@medicine-guidebook.com